Protocolo para avaliação do efeito in vitro de diodos emissores de luz violeta (LEDs) 410 nm ± 10 nm em culturas de levedura
DOI:
https://doi.org/10.17267/2675-021Xevidence.2022.e4736Palavras-chave:
Fototerapia, Agentes antifúngicos, Candida, MalasseziaResumo
INTRODUÇÃO: Candida spp e Malassezia spp causam infecções superficiais que podem ser resistentes aos tratamentos convencionais. A terapia com diodos emissores de luz violeta (LEDs) é uma alternativa terapêutica. OBJETIVO: Descrever o protocolo de avaliação do efeito antifúngico in vitro dos LEDs violeta 410 nm ± 10 nm sobre a Candida spp e Malassezia spp PROTOCOLO: LEDs de 410 nm ± 10 nm são aplicados a uma suspensão fúngica em fluências de 61,13 J/cm2, 91,70 J/cm2 e 183,39 J/cm2. Os isolados são cultivados por 48 a 72 horas. As unidades formadoras de colônias (UFCs) são quantificadas por contagem visual e a porcentagem de ocupação da placa de cultura por análise digital. A morfologia é avaliada por microscopia de luz e coloração de Gram, e o metabolismo/função da levedura por microscopia eletrônica de transmissão, avaliação de espécies reativas de oxigênio e fragmentação de DNA. ANÁLISE DOS DADOS: O percentual de inibição dos LEDs é calculado considerando o crescimento da condição de controle negativo e o percentual de ocupação da placa por leveduras, dividindo-se o número de pixels classificados como colônias pelo número total de pixels na placa. Os aspectos morfológicos e funcionais são descritos para a intervenção e controle negativo. O teste ANOVA é utilizado para comparar as porcentagens médias de inibição de crescimento e ocupação de placa entre as três fluências dos LEDs 410 nm ± 10 nm e o controle negativo. RESULTADOS ESTIMADOS: Pretendemos determinar o efeito antifúngico das diferentes fluências de LEDs 410 nm ± 10 nm sobre Candida spp e Malassezia spp. A avaliação de outras espécies de fungos por este protocolo deve ser investigada.
OBJETIVO: Descrever o protocolo de avaliação do efeito antifúngico in vitro dos LEDs violeta 410 nm ± 10 nm sobre Candida spp. e Malassezia spp.
PROTOCOLO: LEDs de 410 nm ± 10 nm são aplicados a uma suspensão fúngica em fluências de 61,13 J/cm2, 91,70 J/cm2 e 183,39 J/cm2. Os isolados são cultivados por 48 a 72 horas. As unidades formadoras de colônias (UFCs) são quantificadas por contagem visual e porcentagem de ocupação da placa de cultura por análise digital. A morfologia é avaliada por microscopia de luz e coloração de Gram, e metabolismo/função da levedura por microscopia eletrônica de transmissão, avaliação de espécies reativas de oxigênio e fragmentação de DNA.
ANÁLISE DOS DADOS: o percentual de inibição dos LEDs é calculado considerando o crescimento da condição de controle negativo e o percentual de ocupação da placa por leveduras, dividindo-se o número de pixels classificados como colônias pelo número total de pixels na placa. Os aspectos morfológicos e funcionais são descritos para a intervenção e controle negativo. O teste ANOVA é utilizado para comparar as porcentagens médias de inibição de crescimento e ocupação de placa entre as três fluências dos LEDs 410 nm ± 10 nm e o controle negativo.
RESULTADOS ESTIMADOS: Pretendemos determinar o efeito antifúngico das diferentes fluências de LEDs 410 nm ± 10 nm sobre Candida spp. e Malassezia spp. A avaliação de outras espécies de fungos por este protocolo deve ser investigada.
Downloads
Referências
(1) Brown GD, Denning DW, Gow NAR, Levitz SM, Netea MG, White TC. Hidden Killers: human fungal infections. Sci Transl Med. 2012;4(165):165rv13. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3004404
(2) Hay R. Superficial fungal infections. Med (United Kingdom). 2017;45(11):707-10. https://doi.org/10.1016/j.mpmed.2017.08.006
(3) Linhares IM, Amaral RLG, Robial R, Eleutério Junior J. Vaginites e vaginoses: Protocolos Febrasgo – Ginecologia, nº 24. [Internet]. São Paulo: Federação Brasileira das Associações de Ginecologia e Obstetrícia; 2018. Available from: https://www.febrasgo.org.br/images/pec/Protocolos-assistenciais/Protocolos-assistenciais-ginecologia.pdf/NOVO_Vaginites-e-Vaginoses.pdf
(4) Vicente MF, Basilio A, Cabello A, Peláez F. Microbial natural products as a source of antifungals. Clin Microbiol Infect. 2003;9(1):15-32. https://doi.org/10.1046/j.1469-0691.2003.00489.x
(5) Oliveira PM, Mascarenhas RE, Lacroix C, Ferrer SR, Oliveira RPC, Cravo EA, et al. Candida species isolated from the vaginal mucosa of HIV-infected women in Salvador, Bahia, Brazil. Braz J Infect Dis. 2011;15(3):239-44. https://doi.org/10.1590/S1413-86702011000300010
(6) Boatto HF, Girão MJBC, Moraes MS, Francisco EC, Gompertz OF. The role of the symptomatic and asymptomatic sexual partners in the recurent vulvovaginitis. Rev Bras Ginecol e Obstet. 2015;37(7):314-8. https://doi.org/10.1590/S0100-720320150005098
(7) Maraschin MM, Spader T, Alves D, Mario N, Rossato L, Lopes PGM. Infections by malassezia?: new approachs. Saúde (Santa Maria). 2008;34(1 e 2):4-8. https://doi.org/10.5902/223658346488
(8) Lorch JM, Palmer JM, Vanderwolf KJ, Schmidt KZ, Verant ML, Weller TJ, et al. Malassezia vespertilionis sp. nov.: a new cold-tolerant species of yeast isolated from bats. Persoonia. 2018;41:56-70. https://doi.org/10.3767/persoonia.2018.41.04
(9) Grice EA, Dawson TL 23 Jr. Host-microbe interactions: Malassezia and human skin. Curr Opin Microbiol. 2017;40:81-87. https://doi.org/10.1016/j.mib.2017.10.024
(10) Prohic A, Sadikovic TJ, Krupalija-Fazlic M, Kuskunovic-Vlahovljak S. Malassezia species in healthy skin and in dermatological conditions. Int J Dermatol. 2016;55(5):494-504. https://doi.org/10.1111/ijd.13116
(11) Sampaio ALSB, Mameri ACA, Vargas TJS, Ramos-e-Silva M, Nunes AP, Carneiro SCS. Seborrheic dermatitis. Continuing Medical Education. An Bras Dermatol. 2011;86(6):1061–74. https://doi.org/10.1590/S0365-05962011000600002
(12) Martin F, Taylor GP. Prospects for the management of human T-cell lymphotropic virus type 1-associated myelopathy. AIDS Rev. 2011;13(3):161-70. Cited: PMID: 21799534.
(13) Schierhout G, McGregor S, Gessain A, Einsiedel L, Martinello M, Kaldor J. Association between HTLV-1 infection and adverse health outcomes: a systematic review and meta-analysis of epidemiological studies. Lancet Infect Dis. 2020;20(1):133-43. https://doi.org/10.1016/s1473-3099(19)30402-5
(14) Nishimoto AT, Sharma C, Rogers PD. Molecular and genetic basis of azole antifungal resistance in the opportunistic pathogenic fungus Candida albicans. J Antimicrob Chemother. 2020;75(2):257-270. https://doi.org/10.1093/jac/dkz400
(15) Rhimi W, Theelen B, Boekhout T, Aneke CI, Otranto D, Cafarchia C. Conventional therapy and new antifungal drugs against Malassezia infections. Med Mycol. 2021;59(3):215-234. https://doi.org/10.1093/mmy/myaa087
(16) Sparber F, Ruchti F, LeibundGut-Landmann S. Host Immunity to Malassezia in Health and Disease. Front Cell Infect Microbiol. 2020;10:198. https://doi.org/10.3389/fcimb.2020.00198
(17) Xuan M, Lu C, He Z. Clinical characteristics and quality of life in seborrheic dermatitis patients: a cross-sectional study in China. Health Qual Life Outcomes. 2020;18:308. https://doi.org/10.1186/s12955-020-01558-y
(18) Willems HME, Ahmed SS, Liu J, Xu Z, Peters BM. Vulvovaginal Candidiasis: A Current Understanding and Burning Questions. J Fungi (Basel). 2020;6(1):27. https://doi.org/10.3390/jof6010027
(19) Moorhead S, Maclean M, MacGregor SJ, Anderson JG. Comparative Sensitivity of Trichophyton and Aspergillus Conidia to Inactivation by Violet-Blue Light Exposure. Photomed Laser Surg. 2016;34(1):36-41. https://doi.org/10.1089/pho.2015.3922
(20) Demitto FO, Amaral RCR, Biasi RP, Guilhermetti E, Svidzinski TIE, Baeza LC. Antifungal susceptibility of Candida spp. in vitro among patients from Reginal University Hospital of Maringá-PR. J Bras Patol Med Lab. 2012;48(5):315-21. https://doi.org/10.1590/S1676-24442012000500003
(21) Wi HS, Na EY, Yun SJ, Lee JB. The antifungal effect of light emitting diode on Malassezia yeasts. J Dermatol Sci. 2012;67(1):3-8. https://doi.org/10.1016/j.jdermsci.2012.04.001
(22) Ash C, Dubec M, Donne K, Bashford T. Effect of wavelength and beam width on penetration in light-tissue interaction using computational methods. Lasers Med Sci. 2017;32(8):1909–18. https://doi.org/10.1007/s10103-017-2317-4
(23) Carrillo-Muñoz AJ, Rojas F, Tur-Tur C, Sosa MA, Diez GO, Espada CM, et al. In vitro antifungal activity of topical and systemic antifungal drugs against Malassezia species. Mycoses. 2013;56(5):571-75. https://doi.org/10.1111/myc.12076
(24) Robatto M, Pavie MC, Tozetto S, Brito MB, Lordêlo P. Blue Ligth Emitting Diode in Treatment of Recurring Vulvovaginal Candidiasis: a Case Report. Brazilian J Med Hum Heal. 2017;5(4):162–8. https://doi.org/10.17267/2317-3386bjmhh.v5i4.1472
(25) Yarrow D. Methods for the Isolation, Maintenance and Identification of Yeast. In: Kurtzman CP, Fell JW, editors. The Yeasts - A Taxanomy Study. 4th ed. Amsterdam: Elsevier Publishers; 1998. p. 77-100. https://doi.org/10.1016/B978-044481312-1/50014-9
(26) Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Brasil), Organização Pan-Americana da Saúde. Método de Referência para Testes de Diluição em Caldo para a Determinação da Sensibilidade de Leveduras à Terapia Antifúngica: norma aprovada [Internet]. 2nd. ed. Pennsylvania; 2002. Available from: https://pesquisa.bvsalud.org/portal/resource/pt/mis-16205
(27) Gonzalez RC, Woods RE. Digital image processing. 3rd. ed. New Jersey: Prentice Hall; 2008.
(28) Gomes-Junior RA, Silva RS, Lima RG, Vannier-Santos MA. Antifungal mechanism of [RuIII(NH3)4catechol]+ complex on fluconazole-resistant Candida tropicalis. FEMS Microbiol Lett. 2017;364(9). https://doi.org/10.1093/femsle/fnx073
Downloads
Publicado
Edição
Seção
Licença
Copyright (c) 2022 Rachel Trinchão Schneiberg Kalid Ribeiro, Élissa da Silva Santos, Rita Elizabeth Moreira Mascarenhas, Marília Wellichan Mancini, Luciana Almeida-Lopes, Tânia Fraga Barros, Carlos Gustavo Regis, Jacqueline de Jesus Silva, Diogo Rodrigo de Magalhães Moreira, Daniel Oliveira Dantas, Beatriz Trinchão Andrade, Jéssica Mirella de Souza Gomes, Cristiane Maria Carvalho Costa Dias, Maria Fernanda Rios Grassi
Este trabalho está licenciado sob uma licença Creative Commons Attribution 4.0 International License.
The authors retain copyrights, transferring to the Journal of Evidence-Based Healthcare only the right of first publication. This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
